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Méthode de Sanger (didéoxynucléotide séquençage)

Une technique pour la détermination de la séquence de base d'un polynucléotide homogène qui agit comme un modèle dans un système de réplication. A petite quantité d'un triphosphate didéoxynucléoside spécifique est fournie avec les quatre triphosphates désoxyribonucléosides normal lors de la réplication. Chaîne se produit chaque fois qu'un didéoxynucléotide est incorporé qui génère un polynucléotide marqué dont longueur de la chaîne, évaluée par électrophorèse sur gel de polyacrylamide, est révélateur de la distance entre l'extrémité 5' de l'apprêt et la position à laquelle le nucléotide normal se produit. De détection de l'électrophorèse bandes peuvent être par une étiquette par exemple 32 P ou, plus récemment, par un fluorophore incorporé dans le primaire (séquençage de primer teinture) ou le didéoxynucléotide (séquençage de terminator de colorant). En fait, dans une variante de la méthode de terminator de colorant, l'étiquetage de chaque des quatre didéoxynucléotide avec un fluorophore qui émet à un permis de longueur d'onde différente, l'identification de la base qui termine chaque électrophorèse bande dans un mélange séparé des quatre (seul le séquençage lane).

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